在細胞培養中,你是否遇到過【細胞狀態突然下滑,原因不明】 、【實驗結果無法重復,數據波動巨大】、【細胞增殖緩慢,傳代周期延長】、【細胞功能實驗出現異常結果】。這些困擾可能正源于一個隱形威脅:內毒素污染。
在細胞培養的精密世界里,一個微小的污染就足以拖慢整個實驗進程。其中,革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的脂多糖(LPS)成分,在細菌死亡或細胞壁破裂后便會釋放出來,成為細胞培養中不容忽視的“隱形刺客"。
內毒素的"罪狀"
內毒素,本質為磷脂多糖-蛋白質復合物,其毒性成分主要為類脂質A。這種微小的分子,雖然肉眼不可見,卻能對細胞產生巨大的影響。
在細胞培養過程中,內毒素的污染可能導致細胞生長緩慢、細胞毒性增加,甚至影響瞬時轉染的效率。更具體地說,內毒素會激活細胞的免疫反應,導致炎癥因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1β(IL-1β)等的釋放。這些炎癥因子可以影響細胞的生理功能,導致細胞內信號通路的紊亂,甚至可能引發細胞凋亡。當細胞處于免疫激活狀態時,它們可能會減緩生長,因為需要將資源用于炎癥反應而非分裂增殖。此外,內毒素可能干擾細胞的代謝途徑,影響蛋白質合成、DNA合成等關鍵過程。
對于進行細胞功能研究(如細胞因子分泌、藥物敏感性評估或誘導分化)的科研人員來說,內毒素的影響更為隱蔽:它可能導致細胞異常分泌IL-6、TNF-α等炎癥因子,造成ELISA檢測出現“假陽性"。
此外,內毒素的“起效劑量"極低——只要培養液中內毒素含量超過0.1 EU/mL,即可顯著激活免疫細胞,引發強烈的免疫反應。
內毒素污染的來源與檢測
內毒素污染時有發生且不易察覺,血清、培養液、緩沖液及配制用水等都可能是污染源。
目前,內毒素的檢測采用鱟試劑法(LAL),包括凝膠法及光度測定法兩大類。
近年來,也出現了電化學適配體傳感器等新興檢測技術,靈敏度較傳統方法有顯著提高。
但預防始終勝于治療,嚴格控制實驗試劑和操作環境中的內毒素水平,才是保障細胞培養成功的根本之道。
HEPES的選擇與質量控制
在細胞培養體系中,緩沖液的選擇對于控制內毒素污染至關重要。HEPES作為一種常用的生物緩沖劑,其內毒素水平直接影響細胞培養結果。
在原代細胞培養、干細胞研究和細胞治療等對質量要求非常高的應用中,可以選擇符合注射劑級別標準的 HEPES 產品。這類產品通常經過更嚴格的質量控制,包括內毒素檢測等關鍵指標,能夠更好地滿足細胞培養的質量要求。
AVT 的 HEPES 作為通過國家藥品監督管理局關聯審評的注射級 A 狀態產品,代表著其質量達到了高標準、嚴要求。該產品內毒素含量嚴格控制在<0.01 EU/mg,遠優于常規細胞培養中 0.1 EU/mL 的控制要求。對于從事原代細胞培養、干細胞研究以及細胞治療相關實驗的科研人員而言,選擇這款超低內毒素 HEPES 不僅能確保實驗結果的可靠性,更是推動科研成果向臨床轉化的重要保障。
隨著細胞治療領域的快速發展,對試劑質量的要求也將不斷提高。嚴格控制內毒素水平,既是保障實驗數據可靠性的基礎,也是推動科研成果向臨床轉化的重要保障。
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